近年來(lái)，水產(chǎn)品硝基呋喃類(lèi)藥物殘留超標事件屢屢發(fā)生，嚴重威脅著(zhù)人民身體健康和我國水產(chǎn)品出口貿易。鑒于硝基呋喃類(lèi)藥物殘留的嚴重危害，我國農業(yè)部于２００２年４月發(fā)布１９３號公告，公布了《食品動(dòng)物禁用獸藥及其他化合物清單》，規定硝基呋喃類(lèi)抗生素在所有食品動(dòng)物中禁止使用，２００３年又將水產(chǎn)品硝基呋喃代謝物納入殘留監控計劃。

目前檢測水產(chǎn)品中的硝基呋喃類(lèi)化合物，可參考的國標是農業(yè)部783號公告-1-2006水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的測定液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法將樣品肌肉組織中殘留的硝基呋喃類(lèi)蛋白結合代謝物在酸性條件下水解，用2-硝基苯甲醛衍生化，然后經(jīng)乙酸乙酯液液萃取凈化后，LC-MS法檢測。該方法使用液液萃取提取，操作復雜耗時(shí)長(cháng)，重現性差，回收率不穩定。

本文采用HyperSep Retain PEP SPE小柱進(jìn)行樣品前處理，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力，能夠得到較高和穩定的回收率。Retain PEP 前處理小柱對于4種硝基呋喃類(lèi)藥物可實(shí)現0.05μg/kg的LOQ，遠遠高于國標方法的0.5μg/kg?；厥章试?9-110%之間，RSD在3-22%之間。使用Hypersil GOLD C18色譜柱，在LC/MS 上具有出色的峰形和分辨率。

樣品提取

2g 樣品中加入4mL 水，0.5mL 0.5M HCL， 加入200μL新鮮配制的50mM 鄰硝基甲苯的DMSO 衍生液，渦勻1min，在37℃水浴中避光衍生過(guò)夜（14-16 小時(shí)）。衍生后加入5mL 0.1M K2HPO4，用0.4 M NaOH調整PH到7.0-7.5，混勻后取上清液。

SPE操作步驟

60mg 3mL HyperSep Retain PEP 固相萃取柱( 貨號：60107-203):

活化

3mL 甲醇，3mL 水

上樣

樣品，1-2mL/min

清洗

5mL 水，2mL 30% 甲醇的水溶液

洗脫

5mL 乙酸乙酯

色譜條件：

色譜柱 Thermo Scientific Hypersil GOLD C18，5μm，100×2.1mm

貨號  25005-102130

流動(dòng)相

A: 0.5mM 醋酸銨水溶液      

B: 甲醇

梯度

進(jìn)樣量 20μL

流速 250μL/min

質(zhì)譜條件：

電噴霧電離源（ESI），正離子模式

選擇反應監控（SRM）掃描模式

噴霧電壓 5000V

離子傳輸管度 300℃

回收率：4 種硝基呋喃類(lèi)藥物回收率在79%-110%, RSD 在3 到22%（n=3）。

LOQ：AHD，AO，SEM，AMO 的LOQ 0.05μg/kg。

結論

Retain PEP 前處理小柱對于4種硝基呋喃類(lèi)藥物可實(shí)現0.05μg/kg的LOQ，回收率在79-110%之間，RSD在3-22%之間,*農業(yè)部783號公告-1-2006水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法方法要求。