近年來(lái)，在液相色譜分析領(lǐng)域，“快速分析”的話(huà)題越來(lái)越多被提起。

在2020年版《中國藥典編制大綱》中，也提到“積極倡導綠色標準和經(jīng)濟標準，推廣采用毒性小、污染少、節約資源、保護環(huán)境、簡(jiǎn)便實(shí)用的檢測方法”。

我們總結了一系列快速分析中色譜柱的選擇攻略，這是后一篇啦~沒(méi)看過(guò)前面的老師可以點(diǎn)擊文字標題查看喲~↓↓↓

★ 快速分析時(shí)的關(guān)鍵因素

：關(guān)于粒徑（點(diǎn)擊查看）

第二彈：關(guān)于流速與柱壓（點(diǎn)擊查看）

★ 快速分析時(shí)色譜柱特性的關(guān)鍵點(diǎn)

第三彈：填充技術(shù)與高流*果（點(diǎn)擊查看）

第四彈：色譜柱的化學(xué)性質(zhì)（點(diǎn)擊查看）

第五彈：關(guān)于流動(dòng)相的置換速度

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流動(dòng)相的置換速度

設定好的流動(dòng)相條件在色譜柱中的置換速度對快速分析來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。

全多孔型填料的保留能力及負載量都很優(yōu)秀，但細孔內的擴散會(huì )導致色譜柱內的液體組成變化需要一定的時(shí)間。

如下圖所示，當填料粒徑縮小時(shí)，在構造上，由于擴散帶來(lái)的液體置換范圍變窄，因此液體置換速度更快——在進(jìn)行梯度條件的多組分分析時(shí)，流動(dòng)相的置換速度將對分析結果產(chǎn)生很大影響。

▲ 不同尺寸填料粒子的擴散情況

下面，將通過(guò)展示一個(gè)肽譜分析數據例，說(shuō)明不同粒徑尺寸對于流動(dòng)相置換速度的影響。

如下圖，分別使用5 μm的MGIII和2 μm的IF柱，在40分鐘的梯度條件下對人血白蛋白胰蛋白酶分解物進(jìn)行分析。

IF柱所得結果與MGIII相比，各色譜峰之間的整體分離度未見(jiàn)明顯提升，反而由于小粒徑導致高柱壓，*沒(méi)有體現出小粒徑色譜柱的優(yōu)勢。這是因為填料粒子表面在平緩的梯度條件下，由于擴散作用導致流動(dòng)相置換速度變慢，因此填料粒徑所帶來(lái)分離性能上的差別未能在結果中體現出來(lái)。

▲ 一般梯度條件下人血白蛋白胰蛋白酶分解物的分析結果

流動(dòng)相：A) 0.05 vol% TFA水溶液

             B) 0.05 vol% TFA乙腈水溶液

           B  2% （0.0 min）-> 50% (40 min) -> 2% (40 min) -> 2% (43 min)

流　速：200 μL/ min

檢測器：UV 210 nm

樣　品：人血白蛋白胰蛋白酶分解物

進(jìn)樣量：2 μL

如下圖，在8分鐘的快速梯度分析結果中，則體現了粒徑差異對分析的顯著(zhù)影響：

▲ 快速梯度條件下人血白蛋白胰蛋白酶分解物的分析結果

流動(dòng)相：A) 0.05 vol% TFA水溶液

             B) 0.05 vol% TFA乙腈水溶液

           B  2% （0.0 min）-> 50% (8 min) -> 2% (8 min) -> 2% (10 min)

流　速：200 μL/ min

檢測器：UV 210 nm

樣　品：人血白蛋白胰蛋白酶分解物

進(jìn)樣量：2 μL

粒徑5 μm的MGIII填料粒子周?chē)囊后w組成變化和細孔內的液體置換之間出現延遲，因此出現了峰形變差的現象；

與此相對，粒徑2 μm的IF柱的分析結果與40分鐘結果相比，雖然分離度有所降低，但比5 μm柱所得峰形更尖銳，這就是填料內部液體置換迅速所帶來(lái)的好處。